MF bezieht sich auf die häufigere CTCL mit einer Hautdominanz und ist normalerweise auf die Haut beschränkt, während SS eine aggressive leukämische Variante von CTCL mit weit verbreiteter Hautbeteiligung ist und durch neoplastische Verteilung gekennzeichnet ist, die hauptsächlich Blut, Haut und Lymphknoten umfasst. In der Tat haben neuere transkriptomische Studien potenzielle diagnostische Biomarker aus Unterschieden in der Genexpression zwischen normalen und bösartigen T-Zellen identifiziert, die unser Verständnis der SS-Biologie verbessern und potenzielle therapeutische Ziele aufdecken könnten. Die Stimulation mit chemischem Agonisten zur Aktivierung der Kernregulation bietet eine spezifischere Bewertung für Signalwege, die für die dynamische Transkriptionsregulation und Genexpression wichtig sind, und beseitigt verwirrende Defekte, die durch vorgelagerte Signaldefekte entstehen können, die durch TCR-Antigenverlust an der Zellmembran entstehen. Die Daten aus dem Vergleich des Transkriptoms von unstimulierten bis stimulierten SS-T-Zellen entlarven funktionelle regulatorische Genexpressionsdefekte, die aus der Analyse ruhender unstimulierter Zellen nicht ersichtlich sind. Darüber hinaus kann die aus diesem Ansatz skizzierte Methode für die Untersuchung von T-Zell-Genexpressionsdefekten bei anderen T-Zell-Immunerkrankungen angepasst werden. Die Prognose für SS-Patienten ist signifikant schlechter als bei MF. CTCL tritt typischerweise bei älteren Erwachsenen mit einem Durchschnittsalter von etwa 60 Jahren 10 auf. Die Inzidenzrate für CTCL war gestiegen, und obwohl die Ursache unklar ist, hat sich die Rate seit stabilisiert 11, Die molekulare Pathogenese von SS bleibt unklar. Genetische, epigenetische und Genexpressionsstudien haben eine Fülle neuartiger Daten hervorgebracht, es gibt jedoch nach wie vor inkonsistente Ergebnisse, hauptsächlich aufgrund der untersuchten kleinen Patientenkohorten 2sowie der Unterschiede im experimentellen Design und in den Kontrollpopulationen 13, Eine verbesserte genomische private sextreffen zary und umgebung transkriptomische Charakterisierung kann Aufschluss über Krankheitsmechanismen und bisher unerforschte therapeutische Ziele geben. Biomarker-Panels, die in einer SS-Kohorte hochempfindlich und spezifisch sind, haben in anderen Kohorten 15 weniger einheitlich abgeschnitten, was ein ernsthaftes Hindernis bei der Entwicklung zuverlässiger diagnostischer und prognostischer Biomarker für SS 16 darstellt. Ideale diagnostische Biomarker werden in malignen T-Zellen konsistent und stark überexprimiert, während sie in normalen T-Zellen fehlen oder fast fehlen Die Entdeckung krankheitsspezifischer Biomarker ist wichtig für die Weiterentwicklung diagnostischer und therapeutischer Protokolle für SS. Qualitativ hochwertige transkriptomische Daten sowohl für maligne als auch für normale T-Zellen erfordern einen effizienten und zuverlässigen Ansatz zur Probenvorbereitung. Hier werden wir eine detaillierte, aber einfache Strategie zur Gewinnung von RNA-Proben aus T-Zell-Populationen diskutieren, die für SS relevant sind. Menschliche Zellen sind potenziell infektiös. Es wird bevorzugt, das Kit-Handbuch für die Inkubationszeit zu befolgen, da jedes kommerzielle Kit seine eigenen Anweisungen hat. Abbildung 1 beschreibt den Prozess der PBMC-Isolierung aus Vollblut. Bitte beachten Sie, dass die Gesamtausbeute an SS-PBMCs mit dem Anfangsblutvolumen und der zirkulierenden Tumorlast jedes Patienten variiert. Wir haben zuvor das obige Aktivierungsprotokoll mit Microarrays kombiniert, um die funktionellen Veränderungen in den Transkriptomen von SS- und ND-T-Zellen zu untersuchen, und haben gezeigt, dass SS-Speicher-T-Zellen und SS-PBMCs Zytokin und andere Immunantwortgene im Vergleich zu ND-T-Zellen und PBMCs schlecht exprimieren 19,22, Dieser Defekt in der funktionellen Genexpression in SS-T-Zellen wurde inzwischen von anderen Gruppen 24 bestätigt. Darüber private sextreffen zary und umgebung werden viele Gene, die normalerweise nicht in ND-T-Zellen exprimiert werden, in SS-T-Zellen sowohl in Ruhe als auch nach der Stimulation hoch exprimiert Abbildung 4. Dazu gehören die zuvor beschriebenen SS-Biomarkergene DNM3, PLS3TOX und TWIST1 25,26,27 sowie ANK1 und SGCEdie zuerst von unserer Gruppe berichtet wurden. Diese positiven Biomarker werden in SS, aber nicht in ND stark exprimiert und vermeiden technische Fallstricke, die mit negativen Biomarkern verbunden sind. Abbildung 1: PBMC-Isolierung aus Vollblut. Lymphozyten wurden durch Lichtstreuung A eingezäunt, lebende Lymphozyten schlossen eFluorViabilitätsfarbstoff B aus und C repräsentiert nicht ausgewählte normale Spender ND. Der Genexpressions-Z-Score wird durch eine Farbskala von Rot hohe Expression bis grün niedrige Expression dargestellt. Mehrere SS-Biomarker-Gene sind stark exprimiert und Zytokingene werden in SS-T-Zellen im Vergleich zu Private sextreffen zary und umgebung schlecht exprimiert. Es wurden mehrere Möglichkeiten zur Isolierung von PBMCs entwickelt, von denen jede ihre eigenen Vorteile und Einschränkungen hat Das Volumen des Blutes für die PBMC-Isolierung hängt von mehreren Faktoren wie Gesundheit und Alter des Forschungssubjekts und auch von der Expertise des Phlebotomikers ab. Ein kritischer Verfahrensschritt im Protokoll ist die Bildung des Schrittgradienten. Eine schlechte Schichtung kann dazu führen, dass PBMCs an der Grenzfläche teilweise oder vollständig versagen. Wir bevorzugen die hier beschriebene Under-Layering-Methode, da es einfach ist, die untere Schicht zu starten. Um das gesamte Dichtemedium unter dem Blut vollständig abzugeben, ist es wichtig, eine Pipettehilfe ohne Luftlecks zu verwenden.
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